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如何保证PCR的特异性? 除了引物,退火温度,最重要的就是采用热启动PCR!

发布日期:2019年10月28日   浏览次数647
热启动PCR的核心成份为热启动DNA聚合酶。热启动酶活性位点被抗体封闭,仅在PCR变性加热之后释放酶活,避免了PCR体系配制过程中引物和模板的非特异扩增以及引物的截短,保证PCR扩增产物的特异性。热启动酶在常温时酶活性封闭越好,PCR过程中的特异性越好。



Ultra HiFidelity PCR Kit是由重组酶Ultra HiFi结合新型合成亲和性配体与独特配制的高效稳定扩增缓冲体系组成。其中Ultra HiFi DNA Polymerase是通过定向分子进化技术开发的新型快速高效热启动的高保真DNA聚合酶。两种亲和配体分别封闭DNA聚合酶的5’-3’聚合酶活性和3’-5’校正活性,需要通过95℃热启动程序才能释放酶活。该反应体系采用TIANGEN独特的K+-NH4+离子缓冲系统,保证引物和模板的高效结合,更加有助于长片段和低浓度模板下的扩增;体系内独特的氢键调节因子可有效的消除扩增偏好性。



Ultra HiFi具有热启动(Hot Start)功能,有效防止PCR反应前的引物错配和引物降解,保证扩增产物的特异性。使用分子信标法(Ma et al., Anal Biochem, 2006)检测不同高保真酶的热启动性,结果表明Ultra HiFi真正具有热启动活性,其余产品热启动活性差,在40-50℃时均有链退火和延伸能力。

超强高保真PCR试剂盒


Ultra HiFidelity PCR Kit






产品特点


• 操作简便—2×预混Mix形式,只需加入模板及引物即可进行PCR

• 高保真性—保真度为Taq聚合酶的50倍

• 高特异性—具有优良的热启动性,保证产物特异性

• 快速扩增—延伸速度可达10-15 sec/kb

• 延伸力强—可扩增长至20 kb的DNA片段

• 试用广泛—试剂盒包含PCR Enhancer,适合于高GC和复杂模板扩增


优良的高保真性,为Taq酶的50


Ultra HiFi保真性是普通Taq酶的50 倍,以Taq酶(不具有矫正活性)的聚合保真性作为参比。


极速扩增,短时完成长片段克隆


Ultra HiFi对于小于4 kb 的片段,延伸速度可达5 sec/kb,长片段可适当延长延伸时间,使用30 sec/kb 的时间可扩增15 kb 以上片段。M:TIANGEN D15000 Marker


普适性强、特异性高,不同来源的高GC和长片段均能轻易阅读


Ultra HiF具有高特异性,针对于不同类型模板保证扩增成功率及产物量。

图A. Ultra HiFi扩增结果

图B. 国外竞品K公司高保真酶扩增结果

图C.国外竞品N公司高保真酶扩增结果

M:TIANGEN D15000 Marker

Lan1-5. 不同长度模板扩增结果:1. 750 bp; 2. 1kb; 3. 2kb;4. 4kb; 5. 6kb

Lan6. 高GC模板扩增结果:6.1915 bp (GC%为70%);

Lan7-11. 多种基因组2kb模板扩增结果:7.大鼠; 8.水稻; 9.小麦; 10.玉米; 11.细菌; 

lan12-14. 8 kb长片段扩增结果:

12.水稻; 13.玉米; 14.细菌;

lan15. 15 kb长片段扩增结果:15. λDNA (15kb)


TIANGEN Ultra HiFi PCR Kit

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