蛋白内参选错惨被批？避坑指南来了
回想小编刚进实验室那会儿，
真的是凭着一股莽劲儿在做实验！
有次跑蛋白选内参，
脑子一热跟风选了actin，
完全没考虑我们的实验样本是细胞核，
结果数据出来惨不忍睹，
组会上直接被老师拎出来重点 “关照”，
当着全实验室的面反复强调：
内参不是随便选的！
这波社死真的让我记到了现在，每次师弟师妹做实验都要嘱咐：“内参选择绝对不能偷懒跟风，一定要结合实验的具体场景、样本类型来量身敲定。”
为了不让更多小伙伴踩我同款大坑，我连夜翻遍实验笔记，把内参选择的关键要点都整理出来了，全是实打实的避坑干货，赶紧码住，下次做实验直接抄作业！
内参选择的基本原则
1. 考虑样本类型和蛋白表达部位
考虑样品物种来源以及目的蛋白的表达部位，如全细胞、细胞核、细胞质、细胞膜或血清、血浆样本等。比如β-actin主要在胞浆中表达，在细胞核内几乎不表达，因此它不能作为胞核蛋白研究的内参。
2. 考虑靶蛋白和内参分子量
选择内参与要检测的蛋白分子量最好相差5 kDa以上。比如目的蛋白大约为40 kDa，最好就不要选β-actin（43 kDa）和GAPDH（30-40 kDa）作为内参，可以考虑用Tubulin（55 kDa左右）作为内参。
3. 明确实验条件和内参丰度
考虑实验条件处理是否影响内参表达水平，内参在样品中丰度是否过低，选择稳定且高表达的蛋白作为内参。如进行缺氧、诱导糖尿病等处理时，GAPDH的表达会增高，不能用来做内参。
4. 参考已经发表文献选择内参
可以参考相同研究样本或相关研究领域已发表的文献进行内参选择。
WB内参选择对照表
常见内参及注意事项
·β-actin（β-肌动蛋白）
actin是肌动蛋白，细胞的一种重要骨架蛋白，分布于各种组织中，对于大多数组织和细胞来说，它广泛分布于细胞浆内，是已知最保守的蛋白质之一。
·GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）
参与糖酵解的一种关键酶，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定。
·Tubulin（微管蛋白）
tubulin和actin类似，是细胞骨架的组成部分，分为有两种类型：α-tubulin和β-tubulin。
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