技术干货-qPCR引物设计保姆级教程

发布时间： 2026-01-05 浏览量：0

qPCR引物设计-NCBI 保姆级教程 | 四步设计特异性引物

四步设计特异性引物 | 手把手教会 | 适合初学者

第一步：查询基因

1.1

进入NCBI官网选择Gene

访问NCBI官网，在导航栏中找到"Gene"选项并点击进入。

[图1：NCBI官网首页，展示导航栏中Gene选项位置]

1.2

输入基因名称和物种名称

在搜索框中输入基因名称和物种名称进行搜索。

1.3

点击基因名称或ID

在搜索结果中选择正确的基因名称或基因ID进入详细信息页面。

第二步：查找序列

2.1

点击基因名后跳转的页面下拉，找到mRNA and protein，点击NM号

2.2

点击NM号后跳转的页面，选择pick Primers

第三步：设计引物

3.1

pick Primers后自动填入基因序列号，设定所需产物大小及退火温度

3.2

其他参数保持不变，点击get primers

3.3

挑选qPCR引物标准

第四步：引物特异性验证

4.1

回到NCBI首页点击BLAST跳转后下拉点击Primer-BLAST

4.2

输入前面设计好的序列，选择好对应的物种，点击get primers

4.3

验证结果解读